觀察性研究表明，代謝產(chǎn)物可能對(duì)原發(fā)性醛固酮增多癥的發(fā)展產(chǎn)生影響。然而，這些關(guān)聯(lián)是否具有因果性仍不確定。本研究旨在評(píng)估循環(huán)代謝產(chǎn)物與原發(fā)性醛固酮增多癥之間的因果關(guān)系。我們采用雙樣本MR分析方法來(lái)探討這一因果關(guān)聯(lián)。循環(huán)代謝產(chǎn)物的匯總數(shù)據(jù)來(lái)自一項(xiàng)大規(guī)模已發(fā)表的全基因組關(guān)聯(lián)研究，而原發(fā)性醛固酮增多癥的數(shù)據(jù)則來(lái)自FinnGen R12，包括931例病例和479,069名歐洲血統(tǒng)的對(duì)照者。因果效應(yīng)的估計(jì)采用反向方差加權(quán)方法，同時(shí)應(yīng)用MR-Egger回歸、加權(quán)中位數(shù)和加權(quán)眾數(shù)方法作為補(bǔ)充分析，以評(píng)估結(jié)果的穩(wěn)健性。為驗(yàn)證觀察到的關(guān)聯(lián)的可靠性，我們還進(jìn)行了敏感性分析和反向MR分析。此外，使用MetaboAnalyst 5.0開(kāi)展了代謝通路富集分析。最終，我們鑒定出59種與原發(fā)性醛固酮增多癥在統(tǒng)計(jì)學(xué)上具有名義相關(guān)性的代謝物/代謝比（P IVW < 0.05），其中37種表現(xiàn)出正向的、提示性因果關(guān)系，另有29種表現(xiàn)出負(fù)向的、提示性因果效應(yīng)。通路分析突出了兩個(gè)顯著富集的代謝通路：甘油磷脂代謝（p = 4.63 × 10??）和甘油三酯代謝（p = 0.041）。

總體MR分析結(jié)果

本次分析共納入480,000名歐洲血統(tǒng)的個(gè)體，包括931例原發(fā)性醛固酮增多癥患者和479,069名健康對(duì)照者。本研究?jī)H報(bào)告與原發(fā)性醛固酮增多癥呈正向關(guān)聯(lián)的代謝物結(jié)果。所有陽(yáng)性代謝物所對(duì)應(yīng)的SNP數(shù)量介于11至85之間，其遺傳預(yù)測(cè)效應(yīng)的F統(tǒng)計(jì)值均大于10，說(shuō)明工具變量具有良好的解釋力。四種MR方法的結(jié)果共同識(shí)別出49種血清代謝物和17種代謝比與原發(fā)性醛固酮增多癥存在關(guān)聯(lián)（IVW法P<0.05，且四種方法結(jié)果方向一致）。其中，有7種代謝物的結(jié)構(gòu)和功能尚未明確，包括X-11852、X-11849、X-12410、X-12816、X-13431、X-12117和X-17438。59種已明確結(jié)構(gòu)的代謝物/代謝比涉及多種代謝通路，包括氨基酸、脂類、碳水化合物和維生素代謝。其中，37種代謝物/代謝比顯示出與原發(fā)性醛固酮增多癥之間具有正向提示性因果關(guān)系（OR>1），而29種則呈現(xiàn)負(fù)向提示性因果效應(yīng)（OR<1）。

血清代謝物與原發(fā)性醛固酮增多癥的關(guān)聯(lián)

通過(guò)IVW方法分析發(fā)現(xiàn)，有32種已明確結(jié)構(gòu)的代謝物/代謝比和5種未定義代謝物與原發(fā)性醛固酮增多癥呈正向提示性因果關(guān)系。另有27種已明確結(jié)構(gòu)的代謝物/代謝比和2種未定義代謝物與原發(fā)性醛固酮增多癥呈負(fù)向提示性因果關(guān)系。

另外三種MR方法（MR-Egger、加權(quán)眾數(shù)、加權(quán)中位數(shù)）的結(jié)果在因果效應(yīng)的方向和強(qiáng)度上與IVW方法基本一致。然而，當(dāng)采用Bonferroni校正（顯著性閾值p<0.05/1400≈3.57×10??）進(jìn)行嚴(yán)格顯著性檢驗(yàn)時(shí)，所有代謝物均未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著水平，提示本研究結(jié)果僅為提示性因果關(guān)聯(lián)。

敏感性分析顯示，66種代謝物/代謝比均未表現(xiàn)出異質(zhì)性或水平多效性（p>0.05）。逐個(gè)SNP排除分析表明，未發(fā)現(xiàn)單個(gè)SNP對(duì)MR結(jié)果產(chǎn)生顯著影響。

原發(fā)性醛固酮增多癥與血清代謝物的因果關(guān)聯(lián)

我們進(jìn)行了雙向MR分析，以評(píng)估原發(fā)性醛固酮增多癥與1400種代謝物/代謝比之間是否存在反向因果關(guān)系。IVW方法作為主要分析方法，其余三種方法作為補(bǔ)充手段。四種方法的結(jié)果一致，均未發(fā)現(xiàn)原發(fā)性醛固酮增多癥對(duì)代謝物具有反向因果影響（p>0.05）。

代謝組分析

我們對(duì)42種結(jié)構(gòu)明確且與原發(fā)性醛固酮增多癥具有提示性因果關(guān)系的代謝物進(jìn)行了代謝通路分析。借助KEGG和HMDB數(shù)據(jù)庫(kù)，我們成功映射了其中的36種代謝物。分析結(jié)果顯示，有兩個(gè)代謝通路可能與原發(fā)性醛固酮增多癥相關(guān)：甘油磷脂代謝通路（p=4.63×10??）和甘油三酯代謝通路（p=0.041）。因此，我們推測(cè)這些代謝物所涉及的代謝機(jī)制可能在原發(fā)性醛固酮增多癥的發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮作用。

研究設(shè)計(jì)

本研究采用雙樣本雙向MR分析方法，評(píng)估1400種代謝物/代謝比與原發(fā)性醛固酮增多癥之間的因果關(guān)系。此外，我們還基于MR分析結(jié)果開(kāi)展代謝組分析，以探索代謝物影響原發(fā)性醛固酮增多癥的潛在代謝通路。MR分析遵循三項(xiàng)基本假設(shè)：（1）工具變量（IV）與暴露因素之間存在強(qiáng)相關(guān)性（相關(guān)性假設(shè)）；（2）工具變量與影響暴露-結(jié)局關(guān)系的混雜因素?zé)o關(guān)（獨(dú)立性假設(shè)）；（3）工具變量?jī)H通過(guò)暴露因素影響結(jié)局變量（排他性假設(shè)）。本研究的設(shè)計(jì)與報(bào)告嚴(yán)格遵循STROBE-MR指南。

數(shù)據(jù)來(lái)源

關(guān)于單核苷酸多態(tài)性與血清代謝物之間關(guān)聯(lián)的匯總統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)來(lái)自一項(xiàng)已發(fā)表的大型全基因組關(guān)聯(lián)研究，該研究涵蓋了1400種血清代謝物/代謝比，并劃分為八大類主要代謝類別：氨基酸、碳水化合物、輔酶與維生素、能量代謝、脂質(zhì)、核苷酸、肽類及外源物質(zhì)。原發(fā)性醛固酮增多癥相關(guān)SNP的匯總數(shù)據(jù)來(lái)自FinnGen R12數(shù)據(jù)庫(kù)，包括931例病例（依據(jù)登記數(shù)據(jù)中ICD-8、9和10的E26編碼識(shí)別）和479,069名對(duì)照者。所有參與者均為歐洲血統(tǒng)。由于本研究所使用的數(shù)據(jù)均為公開(kāi)可用數(shù)據(jù)，因此無(wú)需額外的倫理審批或知情同意。

工具變量篩選

為確保工具變量的有效性，其篩選過(guò)程需滿足MR分析的三大基本假設(shè)。因此，我們制定了嚴(yán)格的篩選標(biāo)準(zhǔn)?？紤]到達(dá)到全基因組顯著性的SNP數(shù)量有限，我們將初篩p值閾值設(shè)定為1×10??，并排除了與結(jié)局變量相關(guān)的SNP。對(duì)于每種血清代謝物，我們?cè)O(shè)定連鎖不平衡閾值為r2<0.001，遺傳窗口設(shè)為10,000 kb，以排除高度相關(guān)的SNP，僅保留相互獨(dú)立的SNP。此外，為減少弱工具變量帶來(lái)的偏倚，我們計(jì)算了每個(gè)SNP的F值，僅保留F值大于10的強(qiáng)工具變量。F值的計(jì)算公式為：F = R2 × (N ? 2)/(1 ? R2)，其中R2為所選SNP對(duì)暴露變量解釋的方差比例，N為GWAS的樣本量。

MR分析

在MR分析中，我們采用傳統(tǒng)的固定效應(yīng)反向方差加權(quán)方法評(píng)估暴露對(duì)結(jié)局的因果效應(yīng)。若Cochran’s Q統(tǒng)計(jì)量提示方差存在異質(zhì)性，我們則采用隨機(jī)效應(yīng)IVW方法進(jìn)行調(diào)整。為進(jìn)一步驗(yàn)證結(jié)果的可靠性，我們還開(kāi)展了逐個(gè)SNP剔除分析，以評(píng)估是否存在單個(gè)SNP對(duì)總體因果關(guān)系的顯著影響。我們采用比值比及其95%置信區(qū)間來(lái)量化暴露與結(jié)局之間的關(guān)聯(lián)。當(dāng)滿足以下四項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，我們認(rèn)為某代謝物與原發(fā)性醛固酮增多癥之間存在提示性因果關(guān)系：（1）IVW分析p值<0.05；（2）四種MR方法在因果方向上保持一致；（3）Steiger檢驗(yàn)確認(rèn)因果方向正確；（4）無(wú)異質(zhì)性與多效性存在。所有分析均使用R語(yǔ)言4.3.0版本中的TwoSampleMR軟件包完成。

代謝通路分析

通過(guò)MR方法篩選出的陽(yáng)性代謝物納入代謝通路分析，分析依據(jù)KEGG與HMDB數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行。我們首先在人體代謝物數(shù)據(jù)庫(kù)（HMDB）中查詢相關(guān)代謝物ID。為探索與原發(fā)性醛固酮增多癥生物學(xué)過(guò)程可能相關(guān)的代謝物聚類或通路，我們利用MetaboAnalyst 5.0（https://www.metaboanalyst.ca/）富集分析模塊開(kāi)展代謝通路分析。

本研究通過(guò)雙樣本孟德?tīng)栯S機(jī)化方法系統(tǒng)評(píng)估了1400種循環(huán)代謝物/代謝比與原發(fā)性醛固酮增多癥之間的因果關(guān)聯(lián)，結(jié)合多種統(tǒng)計(jì)方法確保結(jié)果的穩(wěn)健性與可靠性。分析共識(shí)別出59種與疾病相關(guān)的代謝物/代謝比，其中37種呈正向提示性因果效應(yīng)，29種呈負(fù)向提示性因果效應(yīng)。敏感性分析與反向MR分析結(jié)果一致，未發(fā)現(xiàn)反向因果關(guān)系及混雜偏倚。此外，代謝通路富集分析進(jìn)一步揭示了甘油磷脂代謝和甘油三酯代謝可能在疾病發(fā)生機(jī)制中發(fā)揮重要作用。研究結(jié)果提示血清代謝物在原發(fā)性醛固酮增多癥的發(fā)病過(guò)程中可能具有潛在影響，為其早期篩查及干預(yù)策略提供了新的科學(xué)依據(jù)。