方法：研究于2023年1月至2024年6月在南通大學附屬醫(yī)院開展，收集關節(jié)手術患者滑膜組織樣本。VOPP1功能在體外通過RA成纖維樣滑膜細胞（RA-FLSs, fibroblast-like synoviocytes）和體內(nèi)膠原誘導性關節(jié)炎（CIA, collagen-induced arthritis）大鼠模型驗證。VOPP1表達水平采用定量實時PCR和Western Blot檢測，并評估其對細胞增殖、炎性因子表達及p38絲裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK, mitogen-activated protein kinase）信號通路激活的影響。

結果：首次證實VOPP1 eQTL可增加RA風險，且可正向調(diào)控代謝物X?23,587水平，進一步加重RA風險。VOPP1在RA滑膜組織及RA-FLSs中顯著高表達，通過激活p38 MAPK信號通路促進RA-FLSs增殖和炎癥反應。CIA模型中，敲低VOPP1可減輕關節(jié)損傷和滑膜炎癥。

結論：VOPP1是新的RA易感基因，可能通過升高X?23,587水平并激活p38 MAPK信號通路促進疾病進展。

1. MR分析發(fā)現(xiàn)VOPP1是RA新易感基因

MR設計分三步：步驟1，將19,942個eQTLs作為暴露因素，RA為結局；步驟2，將1,400種代謝物作為暴露因素，RA為結局；步驟3，以VOPP1 eQTL為暴露因素，74種代謝物為結局。步驟1結果顯示，具有VOPP1 eQTL遺傳風險的個體RA風險升高，異質性和多效性檢驗無異常，敏感性分析支持這一結果。

2. VOPP1在RA滑膜組織和RA-FLSs中高表達

GSE55457數(shù)據(jù)庫分析、qPCR及Western Blot均顯示，RA滑膜組織VOPP1表達顯著高于正常對照（NC），RA-FLSs中VOPP1蛋白水平亦顯著升高。

3. 潛在機制：調(diào)控X?23,587水平

步驟2和3結果表明，VOPP1 eQTL與X?23,587代謝物水平升高顯著相關，且該代謝物水平升高也增加RA風險，提示VOPP1可能通過調(diào)控X?23,587水平促進RA發(fā)生。

4. 激活p38 MAPK促進增殖與炎癥

敲低VOPP1后，RA-FLSs中p-p38水平下降，加入p38 MAPK激動劑Anisomycin后部分恢復。流式細胞術和EdU實驗顯示，VOPP1敲低抑制細胞增殖，Anisomycin可部分逆轉。ELISA檢測發(fā)現(xiàn)，VOPP1敲低降低TNF-α和IL-6分泌，激活p38 MAPK可削弱此抑制作用，表明VOPP1依賴p38 MAPK通路促進RA-FLSs增殖與炎癥反應。

5. 體內(nèi)實驗：敲低VOPP1減輕CIA癥狀

CIA模型中，注射VOPP1 siRNA顯著改善關節(jié)炎指數(shù)和足腫脹，病理染色顯示骨破壞、軟骨退變、滑膜增生減輕，TNF-α和IL-6水平下降。

本研究遵循《流行病學觀察性研究報告加強聲明》（STROBE）清單，并符合MR的三大核心假設。整體MR設計包括三個步驟：步驟1以19,942個基因表達數(shù)量性狀位點（eQTLs）為暴露因素，類風濕關節(jié)炎（RA）為結局；步驟2以1,400種代謝物為暴露因素，RA為結局；步驟3以VOPP1 eQTL為暴露因素，74種代謝物為結局。

2. 工具變量（IVs）篩選

步驟1使用的篩選標準為P值<5×10??，連鎖不平衡（LD）閾值為clumped kb=10,000且r2=0.001。步驟2使用相同的LD閾值，P值<1×10??，且F統(tǒng)計量>10。步驟3使用相同的LD閾值，P值<5×10??，且F統(tǒng)計量>10。

3. MR分析與敏感性分析

本研究采用R軟件TwoSampleMR包進行雙樣本MR分析，主要分析方法為反向方差加權（IVW），并結合MR Egger、加權中位數(shù)、加權眾數(shù)和簡單眾數(shù)等方法，P值<0.05為統(tǒng)計學顯著。穩(wěn)健性通過異質性檢驗、多效性評估和逐一排除（leave-one-out）分析驗證，確保符合MR排他性假設。

4. GEO數(shù)據(jù)庫分析

利用GEO數(shù)據(jù)庫比較RA患者與健康人群滑膜組織中VOPP1的表達。

5. 人滑膜組織

正?；そM織樣本（n=5）來自接受半月板關節(jié)鏡手術的患者；RA滑膜組織樣本（n=5）來自接受全膝關節(jié)置換術的RA患者。所有RA患者術前未接受改善病情抗風濕藥（DMARDs）治療，僅使用非甾體抗炎藥（NSAIDs）控制癥狀。

6. 細胞分離與培養(yǎng)

組織切成小塊，用II型膠原酶在含5% CO?的37℃搖床中消化3小時，離心收集細胞后重懸于含10%胎牛血清（FBS）、100 U/mL青霉素和100 μg/mL鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基中，培養(yǎng)于37℃、5% CO?條件下，選取3-6代RA-FLSs用于實驗，并用脂多糖刺激構建體外模型。

7. 蛋白印跡（Western Blot）

總蛋白用含蛋白酶及磷酸酶抑制劑的RIPA裂解液提取，SDS-PAGE分離后轉移至PVDF膜，室溫5%脫脂奶封閉2小時，4℃孵育一抗，洗膜后室溫孵育二抗1小時，化學發(fā)光法顯影，ImageJ分析條帶灰度。

8. 細胞轉染

VOPP1小干擾RNA（siRNA）購自GENE CREATE，序列詳見原文。使用Lipofectamine 3000轉染至6孔板70%融合度的細胞，48 h后收集。

9. 酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）

收集RA-FLSs上清及大鼠血清，按試劑盒說明檢測TNF-α及IL-6水平。

10. 細胞周期與增殖檢測

細胞經(jīng)70%乙醇固定過夜后，PBS洗滌，染色30 min，流式細胞儀檢測；EdU檢測按BeyoClick EdU Kit說明進行，Hoechst染核，倒置熒光顯微鏡觀察。

11. 統(tǒng)計分析

MR分析用R 4.2.1及TwoSampleMR包，細胞周期分析用NovoExpress，統(tǒng)計用GraphPad Prism 9.0。數(shù)據(jù)以均值±標準差（SD）表示，Shapiro–Wilk檢驗正態(tài)性，正態(tài)分布用t檢驗，非正態(tài)用Mann–Whitney U檢驗，P<0.05為顯著差異。

遺傳因素在RA的易感性中起著決定性作用。RA是一種累及全身的慢性炎癥性疾病，表現(xiàn)為關節(jié)炎癥、疼痛、腫脹及結構破壞。既往研究證實，eQTLs是挖掘潛在疾病風險基因的重要工具，為揭示RA的遺傳機制和發(fā)現(xiàn)新靶點提供了有效途徑。